研究背景

膽管癌(Cholangiocarcinoma，CCA)作為起源于膽管上皮的高度惡性腫瘤，具有起病隱匿、預(yù)后極差的特點。2020年FDA批準(zhǔn)培米替尼(Pemigatinib)成為首個CCA靶向藥物，但臨床耐藥現(xiàn)象頻發(fā)，嚴(yán)重影響療效，患者五年生存率仍不足5%。近年來，Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2（ROCK2）被發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的化療耐藥相關(guān)。

江西腫瘤醫(yī)院研究團隊在《Cell Death & Disease》上發(fā)表的研究（DOI: 10.1038/s41419-025-07804-9）揭示了ROCK2在CCA細(xì)胞中對Pemigatinib耐藥的作用機制，并探討其是否通過調(diào)控鐵死亡（ferroptosis）及相關(guān)蛋白DRP1和UBA52來發(fā)揮作用。

客戶需求

江西腫瘤醫(yī)院研究團隊需要高純度的GST、GST-UBA52、His-ROCK2和His-Drp1蛋白。用于進行GST pull-down實驗，驗證ROCK2、UBA52與DRP1之間的相互作用。普健生物（AtaGenix Laboratories Co., Ltd.）受托提供GST、GST-UBA52、His-ROCK2和His-Drp1的定制蛋白表達與純化服務(wù)，確保蛋白質(zhì)適用于相互作用驗證和后續(xù)的功能實驗。

技術(shù)挑戰(zhàn)

1. 蛋白表達與純化難度高：UBA52屬于泛素相關(guān)蛋白，而ROCK2與DRP1均為多結(jié)構(gòu)域的功能性調(diào)控分子，其全長或關(guān)鍵功能域在原核或真核系統(tǒng)中均存在表達難度，易出現(xiàn)錯誤折疊、形成包涵體或被部分降解。

2. 互作驗證的敏感性：ROCK2與DRP1之間不存在直接相互作用，而是通過UBA52介導(dǎo)的競爭性結(jié)合來調(diào)控DRP1的泛素化水平，這對蛋白復(fù)合物的體外重建提出了極高要求。

3. 翻譯后修飾的模擬：UBA52作為E3泛素連接酶，其功能依賴于正確的空間構(gòu)象和酶活性，體外實驗需確保其能夠介導(dǎo)DRP1的泛素化。

定制蛋白解決方案

根據(jù)客戶的需求及提供的序列，AtaGenix為客戶提供了高純度、低內(nèi)毒素、正確折疊和生物活性的GST、GST-UBA52、His-ROCK2和His-Drp1蛋白，用于體外實驗驗證ROCK2與Drp1，UBA52的相互作用。這些蛋白在Co-IP和Western blot分析中起到關(guān)鍵作用，闡明ROCK2通過競爭性結(jié)合UBA52穩(wěn)定Drp1的機制，支持了ROCK2/UBA52/Drp1軸在耐藥中的核心作用。

關(guān)于我們

普健生物致力于提供高質(zhì)量的蛋白抗體開發(fā)、功能驗證等一站式定制服務(wù)，助力科學(xué)研究高效推進。了解更多服務(wù)內(nèi)容，請訪問：http://www.atagenix.com。