炎癥調(diào)控在元生動(dòng)物中的進(jìn)化機(jī)制尚不清楚。本研究以蝦作為模型，通過(guò)血漿蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定MANF為L(zhǎng)PS誘導(dǎo)的血漿蛋白，其在蝦血細(xì)胞中抑制ERK磷酸化和Dorsal表達(dá)，發(fā)揮抗炎作用。

相關(guān)研究發(fā)表于The Journal of Immunology，DOI：10.4049/jimmunol.2100595。

本研究需驗(yàn)證蝦MANF的抗炎功能及其機(jī)制，包括檢測(cè)LPS誘導(dǎo)下血漿MANF水平變化、重組MANF對(duì)蝦血細(xì)胞ROS產(chǎn)生和炎癥相關(guān)基因表達(dá)的影響，以及MANF通過(guò)RPTP調(diào)控ERK通路的作用。

制備高親和力MANF單克隆抗體需解決噬菌體庫(kù)篩選的特異性和親和力問(wèn)題；ELISA檢測(cè)需確保捕獲和檢測(cè)抗體的配對(duì)靈敏度和重復(fù)性；免疫印跡和共沉淀實(shí)驗(yàn)需優(yōu)化對(duì)照設(shè)置以驗(yàn)證蛋白相互作用。

• 抗體/蛋白開(kāi)發(fā)策略：重組MANF作為免疫原，通過(guò)噬菌體庫(kù)篩選制備單克隆抗體，蛋白A純化，獲得高親和力mAb如R4P1-C3、R4P1-H5等。
• 實(shí)驗(yàn)流程：免疫印跡使用R4P1-H5檢測(cè)MANF水平，稀釋度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線優(yōu)化；ELISA采用R4P1-C3捕獲和HRP偶聯(lián)R4P1-H5檢測(cè)，適用于血漿樣本定量。
• 驗(yàn)證手段：陽(yáng)性對(duì)照為重組MANF，陰性對(duì)照為rEGFP；敲降RPTP驗(yàn)證MANF對(duì)ERK抑制依賴性；免疫熒光共定位確認(rèn)RPTP在細(xì)胞膜定位。
• 附加支持：提供SDS-PAGE純度報(bào)告和ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線，確保批次一致性；建議復(fù)現(xiàn)時(shí)使用LPS誘導(dǎo)模型驗(yàn)證抗體特異性。

通過(guò)噬菌體庫(kù)篩選制備單克隆抗體，研究證實(shí)蝦MANF為L(zhǎng)PS誘導(dǎo)血漿蛋白，重組MANF處理抑制蝦血細(xì)胞ROS產(chǎn)生和炎癥基因表達(dá)；MANF與RPTP結(jié)合抑制ERK磷酸化，提供MANF在元生動(dòng)物中調(diào)控免疫和代謝的機(jī)制解釋?zhuān)瑢?duì)理解炎癥進(jìn)化具有意義。

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