研究背景
水稻（Oryza sativa）的籽粒白堊質(zhì)會(huì)負(fù)面影響籽粒品質(zhì)，包括質(zhì)地、碾磨韌性及消費(fèi)者偏好。2025年發(fā)表在《Plant Communications》（DOI：10.1016/j.xplc.2025.101354）上的一篇研究，由中國(guó)國(guó)家水稻研究所水稻生物學(xué)與育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的研究人員完成，鑒定出CHALK10是一種F-box蛋白，通過(guò)介導(dǎo)SEMIDWARF-1（SD1）的泛素化和26S蛋白酶體途徑降解，負(fù)調(diào)控籽粒白堊質(zhì)。研究揭示CHALK10與SD1相互作用，影響赤霉素（GA）水平和淀粉代謝，從而影響胚乳發(fā)育和白堊質(zhì)形成。

客戶需求
水稻生物學(xué)與育種國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室需要高純度重組CHALK10和SD1蛋白，用于共免疫沉淀（co-IP）實(shí)驗(yàn)，以驗(yàn)證它們?cè)谒九呷榘l(fā)育中的相互作用。此外，他們還需要針對(duì)這些蛋白的兔多克隆抗體，用于泛素化和降解研究的免疫印跡實(shí)驗(yàn)。普健生物（AtaGenix Laboratories Co., Ltd.）受委托提供基于大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的定制蛋白表達(dá)、純化及兔多克隆抗體生產(chǎn)服務(wù)，確保與co-IP驗(yàn)證及下游免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的兼容性。

技術(shù)挑戰(zhàn)
1. 蛋白表達(dá)：在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)功能性CHALK10和SD1蛋白的高產(chǎn)表達(dá)，而大腸桿菌缺乏真核生物的翻譯后修飾系統(tǒng)。
2. 蛋白純度：確保高純度蛋白，以滿足敏感的co-IP實(shí)驗(yàn)需求，驗(yàn)證蛋白-蛋白相互作用。
3. 抗體特異性：生產(chǎn)具有高特異性和敏感性的兔多克隆抗體，用于在復(fù)雜的水稻蛋白提取物中檢測(cè)CHALK10和SD1。

定制蛋白與抗體解決方案

1. 蛋白表達(dá)與純化：
- 使用pMAL-c2X（MBP標(biāo)簽CHALK10）和pGEX-6P-1（GST標(biāo)簽SD1）載體在大腸桿菌Rosetta（DE3）細(xì)胞中表達(dá)CHALK10和SD1蛋白，以實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)生產(chǎn)。
- 通過(guò)谷胱甘肽和直鏈淀粉親和層析法純化重組蛋白，確保高純度，適合co-IP和體外泛素化實(shí)驗(yàn)。

2. 兔多克隆抗體生產(chǎn)：
- 用純化的CHALK10和SD1蛋白免疫兔子，生成高滴度多克隆抗體。
- 通過(guò)Western印跡驗(yàn)證抗體特異性，確認(rèn)在水稻原生質(zhì)體提取物中對(duì)CHALK10和SD1的強(qiáng)特異性檢測(cè)。

3. 驗(yàn)證與支持：
- 支持co-IP實(shí)驗(yàn)，確認(rèn)CHALK10-SD1相互作用，使研究團(tuán)隊(duì)能夠驗(yàn)證CHALK10通過(guò)26S蛋白酶體途徑介導(dǎo)SD1降解的作用。
- 提供優(yōu)化抗體在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中性能的技術(shù)支持，促進(jìn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中泛素化SD1的準(zhǔn)確檢測(cè)。