在進行重組蛋白表達時,需要通過一定的技術手段將目的基因置入到宿主細胞內,這個過程我們稱之為細胞轉染。前文中我們和大家介紹過細胞轉染的一些方法,比如物理介導法、生物介導法等(詳情可查看“什么是細胞轉染技術?盤點細胞轉染的原理及其的特點”)??梢哉f,細胞轉染成功與否直接關系到重組蛋白表達的成功。那么,細胞轉染時有哪些因素會影響到因素呢?

1、血清
血清會在一定程度上影響到蛋白的表達,比如DNA陽離子脂質體復合物形成時是不能包含血清的,而且血清也曾一度被認為會降低轉染效率,同時,對于那些對血清含量比較敏感的細胞,會在極大程度上影響到蛋白的表達;
2、抗生素
抗生素(青霉素、鏈霉素等)會在一定程度上影響到細胞轉染,有一些細胞會受到抗生素的影響,需要結合具體情況來選擇是否添加抗生素;
3、細胞狀態(tài)
細胞轉染的過程非常重要,一定不要急于求成,需要讓細胞保持在最佳狀態(tài)時再進行轉染。一般來說,除了細胞狀態(tài)外,還需要盡量保證不要用傳代太多次的細胞去做;
4、細胞鋪板密度
不同的細胞其最佳培養(yǎng)密度是各不相同的,需要結合細胞的類型以及應用而異;
5、啟動子選擇
想要獲得高轉染的活性細胞,和其所選擇的啟動子相關性是非常高的。比如,CMV啟動子在大多數細胞類型中可以獲得較高表達活性;
6、DNA量
高質量的DNA量對于高效表達可以說是至關重要的,轉染的質粒無論是在純度還是在濃度方面都有著很高的需求;
總的來說,影響到細胞轉染效率的因素是非常多的,都需要結合實際情況來進行選擇。所以,我們除了按照實驗順序進行轉染,同時調整好相應的轉染環(huán)境外,還需要主要好相應的細節(jié)問題。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。

聯系我們




