在單克隆抗體制備的過程中，雜交瘤細胞的制備可謂重中之重，它的重要性自然不言而喻。但是，雜交瘤細胞的篩選則關系到我們產生蛋白的質量以及相關成本問題。在單克隆抗體制備的過程中，我們需要進行兩次雜交瘤細胞的篩選，方法各不相同。下面，普健生物就和大家具體聊聊。

　　第一次篩選：

　　淋巴B細胞和骨髓細胞融合后即產生雜交瘤細胞，之后的選擇性培養(yǎng)可謂第一次篩選成功與否的關鍵。一般我們會選擇HAT培養(yǎng)液進行普通細胞的培養(yǎng)，一般采用兩條途徑：

　　1、生物合成途徑(D途徑)。通過氨基酸和其他小分子融合成的原料來供應DNA分子的合成，其中也算作為輔酶參與這個過程，氨基蝶呤則會阻斷DNA合成，這個過程也就是我們常說的D途徑;

　　2、應急途徑(S途徑)。利用次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸酐轉移酶和胸腺嘧啶核糖核苷酸催化黃嘌呤和胸腺嘧啶合成相應的核苷酸;

　　未融合的細胞在D途徑中會被氨基蝶呤阻斷，會因為缺乏繁殖能力而死亡;在S途徑中會因為自身不具備S途徑而死亡;

　　第二次篩選：

　　一般采用有限稀釋克隆下?lián)艿姆椒?，將細胞多倍稀釋后接種在細胞培養(yǎng)板上，其上清液可與特定抗原結合的標記為陽性孔。陽性孔中的細胞需要再次進行有限稀釋操作，3-4次后，即可確認其中的細胞為單克隆抗體。一般來說，第二次篩選的過程也是一個鑒定的過程。

　　總的來說，雜交瘤細胞的篩選需要進行4-5次，這樣才能保證制備出來的細胞是合格的細胞，通過培養(yǎng)，產生的單克隆抗體才是我們需要的。但是這種方式制備出來的抗體因為外部條件的變化，會導致不同批次生產出來的抗體存在著一定的差異。所以，如果需要多次生產同樣的抗體的話，我們需要構建穩(wěn)定細胞株來進行制備。更多有關單克隆抗體制備方面的知識，敬請關注武漢普健生物。